NY∕T 539-2017 副结核病诊断技术(农业)
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ID： |
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文件大小(MB)： |
0.62 |
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页数： |
14 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-19 |
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ICS 11 .220,B 41 NY,中华人民共和国农业行业标准,副结核病诊断技术,Diagnostic techniques for paratuberculosis,NY/T 539-2017,代替NY/T 539- 2002,2017 - 06-12 发布2017 - 10 - 01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 539一2017,刚昌,本标准按照GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准代替NY/ T 539一2002 (( 副结核病诊断技术》。与NY/ T 539一2002 相比，除编辑性修改,外，主要技术变化如下:,一一修改了范围(见第1 章) ;,-一一增加了术语和定义(见第2 章) ;,一一增加了临床诊断(见第3 章) ;,一一修改了细菌学检查(见第4 章) ;,增加了病原分离培养(见第5 章) ;,一一删除了补体结合试验;,一一修改了酶联免疫吸附(ELISA) 试验(见第7 章) ;,一一增加了琼脂扩散试验(见第8 章) ;,一一增加了副结核病诊断方法的适用性(见附录A) 和培养基配制(见附录,本标准参考采用世界动物卫生组织(OIE)(( 陆生动物诊断试验和疫苗于册)) (2016 年OIE 官方网站,在线版)中的副结核病章节,本标准由农业部兽医局提出,本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/ TC 18 1)归口,本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、吉林农业大学,本标准主要起草人:张喜悦、姜秀云、高云航、徐凤宇、范伟兴、孙明军、王伟利、巩红霞、田莉莉、王,岩、赵宏涛,本标准所代替标准的历次版本发布情况为:,一一-NY/ T 539?2002 0,I,NY/T 539-2017,副结核病诊断技术,1 范围,本标准规定了副结核病的诊断技术,本标准的病原分离鉴定、组织病理学和粪便显微镜检查适用于临床病例的确诊;ELISA 和琼脂扩,散试验适用于感染率的流行病学调查以及免疫后个体或群体免疫状态的监测;变态反应试验适用于免,疫状态的监测,各种诊断方法的适用性见附录A ,2 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,2. 1,副结核病(约内氏病paratuberculosis(Johne' s disease),由禽分枝杆菌副结核亚种引起的反鱼动物的一种慢性肠炎性疾病,3 临床诊断,3. 1 临床症状,3. 1. 1 牛的症状表现为进行性消瘦和腹泻，腹泻牛在群中最初是间歇性出现，而后日益增加， 直至腹泻,牛在群中不断出现,3. 1. 2 部分鹿感染后可能突发性腹泻、体重骤降，并在2 周~3 周内死亡,3. l. 3 其他动物可能在元明显腹泻的情况下，几个月后出现极度消瘦,3. 2 病理变化,3. 2. 1 临床症状的严重性与病变程度并无密切相关性,3. 2. 2 牛的小肠和大肠末端黠膜增厚，尤其是回肠末端，应检查其特征性的增厚和皱榴病变。早期病,变可于强光下观察到散在的蚀斑,3. 2. 3 鹿的小肠和大肠未端可见黠膜充血、廉烂和哥哥斑,3. 2. 4 山羊、绵羊的肠系膜淋巴结可见干酷样坏死或钙化,3. 2.5 增生性肠炎病变样品经固定0 0%福尔马林)、切片、苏木紫一伊红染色，病变可见蒙古膜固有层浸,润、淋巴集结和肠系膜淋巴结皮质有大的淡染上皮样细胞和多核朗罕氏巨细胞浸润;经妻一尼氏染色,可见两种细胞中有成丛的或单个的抗酸菌,3. 3 流行特点,3. 3. 1 该病常见于家养和野生反色动物,3. 3. 2 该病主要经消化道感染，也可垂直传播给胎儿,3.3. 3 初次感染禽分枝杆菌副结核亚种的牛群中，首先是2 岁~ 3 岁的牛出现症状。当牛群持续感染,1 年~2 年后，任何年龄段的牛均可出现症状，但3 岁~5 岁奶牛的病例较多,3. 4 结果判定,反鱼动物出现3. 1 的临床症状、具有3 . 2 的病理变化并符合3 . 3 的流行特点时，可判为临床诊断,阳性,1,NY/T 539-2017,4 病原显微镜检查,4. 1 材料准备,4. 1. 1 器材,水浴锅、离心机、显微镜和载玻片,4. 1. 2 试荆,0.5%氢氧化铀溶液(0.5% NaOH) 、妻一尼氏染色(Ziehl-Neelsen 染色、ZN 染色)试剂(配制及染,色方法见附录B) ,4.2 操作方法,取待检粪样(尽可能取带,混匀， 55.C J，j(浴乳化30,mm 离心30min ，去上,氏染色后镜检,4.3 结果判定,4. 3. 1 阳性,在细胞内,阳性,4. 3. 2 阴性,未出现,5,5. 1 材料准,5. 1. 1 器材,磁力,5. 1.2 试剂,膜蛋白酶(,Dubos's 培养基〈,5.2 样品准备,5. 2. 1 组织样晶,为防止污染，用无,从回盲瓣、肠系膜结节,用4 % NaOH 调整pH 至中性,去上清。沉淀用20 mL o. 75%,5. 2.2 粪便样品,粪便样品处理前应一70.C 冻存，不得使用防腐剂,的0 . 5% NaO H 溶液,去沉渣后，再以3000 r/,火焰固定，妻一尼,f s 或改良,不得使用防腐剂,2 . 5%) 的无菌容器中,g~3 000 g 离心30min ，弃,的沉淀即为接种物,将19 粪便放人装有20mL 无菌蒸馆水的50mL 试管中，室温振荡30 min ，静置30min 。取最上层,的5mL 悬浮液，加至含有20 mL o. 95% HPC 的试管中，混匀后室温直立静置18 h 。试管底部的沉淀,即为接种物,5. 3 接种培养,取100μL 接种物，分别接种3 个含分枝杆菌素和1 个不含分枝杆菌素的Herrold' s……
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